NELF-B CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-405667

Übersicht

NELFB kodiert NELF‑B, eine zentrale Untereinheit des Negativ‑Elongationsfaktor‑(NELF-)Komplexes, der gemeinsam mit DSIF die promotornahe Pause der RNA‑Polymerase II reguliert und die produktive Transkriptionselongation koordiniert. Über diesen Kontrollpunkt beeinflusst NELF‑B schnelle, stimulusabhängige Genexpressionsprogramme, die kotranskriptionelle RNA‑Prozessierung sowie die chromatinverknüpfte Steuerung der Transkriptionskinetik. Die NELF‑B‑abhängige Pausierung ist in Signal- und Stressantwortwege eingebettet, die den Transkriptionsoutput und Zellzustandsübergänge feinabstimmen. Eine Fehlregulation der Elongationskontrolle und pausierungsassoziierter Netzwerke wird mit onkogenen Transkriptionsprogrammen und anderen Erkrankungen mit veränderter Genregulation in Verbindung gebracht, wodurch NELFB einen nützlichen Ansatzpunkt für mechanistische Studien zur Transkriptionskontrolle darstellt.

Das NELF-B CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des NELFB-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des NELFB-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von NELFB nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die NELF-B-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von NELFB-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der NELF-B-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf NELFB-Exone abzielen, die für die NELF-B-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere NELFB-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom NELF-B CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom NELF-B CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des NELFB-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das NELF-B HDR-Plasmid (h) und NELF-B HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von NELFB-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten NELFB-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.