Nek7 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-425603

Descripción general

Nek7 (quinasa 7 relacionada con NIMA) es una quinasa de serina/treonina que actúa como un regulador clave de la progresión mitótica, coordinando la actividad del centrosoma, el ensamblaje del huso y la segregación fiel de los cromosomas. En células en proliferación, la señalización de Nek7 favorece las transiciones del ciclo celular y la dinámica de los microtúbulos, vinculando el control por quinasas con la organización del citoesqueleto y con puntos de control que mantienen la estabilidad genómica. Nek7 también se ha implicado en la señalización inmunitaria innata mediante la regulación de la activación del inflamasoma NLRP3, conectando quinasas del ciclo celular con las salidas de vías inflamatorias. Por lo tanto, la actividad o expresión desregulada de Nek7 es relevante para estudios de proliferación aberrante, inestabilidad cromosómica y fenotipos asociados a la inflamación en sistemas de modelos murinos.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO Nek7 (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Nek7 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Nek7 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Nek7 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína Nek7.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Nek7 para la investigación de la señalización de Nek7, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Nek7 críticos para la función de Nek7
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Nek7 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido Nek7 CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido Nek7 CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Nek7. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR Nek7 (m) y el plásmido HDR Nek7 (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Nek7 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Nek7 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.