NEDD4-L CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-429949

概要

Nedd4l は、HECT ドメインをもつ E3 ユビキチンリガーゼである NEDD4-L をコードしており、ENaC などのイオンチャネルやトランスポーターを含む膜タンパク質およびシグナル伝達タンパク質のユビキチン化を触媒することで、タンパク質のターンオーバーを制御します。ユビキチン依存的なエンドサイトーシスやリソソーム／プロテアソーム分解の調節を介して、NEDD4-L は上皮におけるイオン恒常性や、細胞ストレス応答および組織リモデリングに関与するシグナル伝達経路に影響を与えます。マウスでは、Nedd4l 活性の変化がナトリウム取り扱いと血圧調節の破綻に関連するとされ、腎生理、心血管系表現型、炎症性シグナル伝達といった文脈で研究されています。さらに NEDD4-L は細胞極性や分化を制御する経路とも連関しており、上皮バリア機能や発生過程の研究においても重要です。

NEDD4-L CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるNedd4l遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Nedd4l内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Nedd4lのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、NEDD4-Lタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、NEDD4-Lシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Nedd4l欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• NEDD4-Lの機能に不可欠なNedd4lエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Nedd4lゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• NEDD4-L CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびNEDD4-L CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Nedd4l遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  NEDD4-L HDRプラスミド（m）および NEDD4-L HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはNedd4lホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のNedd4l標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。