NEDD4-L CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-429949

Übersicht

Nedd4l kodiert NEDD4-L, eine E3-Ubiquitin-Ligase mit HECT-Domäne, die den Proteinumsatz reguliert, indem sie die Ubiquitinierung von Membran- und Signalproteinen katalysiert, darunter Ionenkanäle und Transporter wie ENaC. Durch die Modulation der ubiquitinabhängigen Endozytose sowie des lysosomalen/proteasomalen Abbaus beeinflusst NEDD4-L die epitheliale Ionenhomöostase und Signaltransduktionswege, die an zellulären Stressantworten und Gewebeumbau beteiligt sind. In Mausmodellen wurde eine veränderte Nedd4l-Aktivität mit einer gestörten Natriumhandhabung und Blutdruckregulation in Verbindung gebracht und in Zusammenhängen der Nierenphysiologie, kardiovaskulärer Phänotypen und inflammatorischer Signalgebung untersucht. NEDD4-L greift zudem in Signalwege ein, die Zellpolarität und Differenzierung steuern, was es für Studien zur epithelialen Barrierefunktion und zu Entwicklungsprozessen relevant macht.

Das NEDD4-L CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Nedd4l-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Nedd4l-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Nedd4l nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die NEDD4-L-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Nedd4l-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der NEDD4-L-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Nedd4l-Exone abzielen, die für die NEDD4-L-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Nedd4l-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom NEDD4-L CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom NEDD4-L CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Nedd4l-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das NEDD4-L HDR-Plasmid (m) und NEDD4-L HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Nedd4l-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Nedd4l-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.