Particules Lentivirales d'Activation (h) NAT-10: sc-406713-LAC

NAT10 code NAT-10, une acétyltransférase de l’ARN surtout connue pour catalyser le dépôt de N4‑acétylcytidine (ac4C) sur divers substrats d’ARN, influençant la stabilité des ARN, l’efficacité de la traduction et le décodage dépendant des codons. Au-delà de la modification de l’ARN, NAT-10 a été impliquée dans des processus nucléolaires et associés à la chromatine, notamment la régulation de la biogenèse des ribosomes et la coordination des programmes du cycle cellulaire et de réponse aux dommages de l’ADN. Une activité altérée de NAT10 a été associée à une croissance dérégulée, à des réponses au stress et à un remodelage du transcriptome observés dans divers contextes pathologiques prolifératifs et neurodéveloppementaux, ce qui en fait un nœud utile pour étudier le contrôle épitranscriptomique de l’ARN. Dans les cellules humaines, la perturbation de NAT10 peut aider à disséquer la manière dont le traitement des ARN dépendant de l’ac4C s’articule avec la protéostase, le stress de réplication et l’état de différenciation.

Les particules d'activation lentivirales NAT-10 (h) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de NAT10 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales NAT-10 (h) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription NAT10, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de NAT-10. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif NAT10 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.