Na+ CP type VIIIα CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-422823
- Zielspezies: mouse
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Na+ CP type VIIIα Das CRISPR/Cas9-Knockout (KO)-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, von denen jedes für die Cas9-Nuklease und eine zielspezifische 20-nt-Guide-RNA (gRNA) kodiert, die für maximale Knockout-Effizienz unter Verwendung von Sequenzen aus der GeCKO v2-Bibliothek entwickelt wurde
- gRNA-Sequenzen lenken Cas9 so, dass es ortsspezifische Doppelstrangbrüche (DSBs) im Na+ CP type VIIIα-Genomlokus induziert, was zu einem Gen-Knockout durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ) führt
- Die Puromycin-Resistenz- und RFP-Gene werden von LoxP-Stellen flankiert, was die Entfernung der Selektionsmarker mittels Cre-Rekombinase (Cre-Vektor: sc-418923) nach der Etablierung stabiler Knockout-Zelllinien ermöglicht
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: Na+ CP type VIIIα: sc-81884
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
Na+ CP type VIIIα CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) | sc-422823 | 20 µg | $397.00 |
Übersicht
Scn8a kodiert den spannungsabhängigen Natriumkanal Na⁺ CP Typ VIIIα der Maus, einen zentralen Faktor für die Initiation von Aktionspotenzialen und für hochfrequentes Feuern in Neuronen. Durch die Vermittlung eines schnellen Na⁺-Einstroms am Axoninitialsegment und an den Ranvier-Schnürringen unterstützt er die neuronale Erregbarkeit sowie die Signalweiterleitung und ist funktionell mit Signalwegen der Membranrepolarisation und der Ionenhomöostase gekoppelt. Eine veränderte SCN8A-Aktivität wird häufig genutzt, um Mechanismen der kanalopathiebedingten Hypererregbarkeit zu modellieren, einschließlich Anfallsanfälligkeit, Auffälligkeiten der sensorischen Verarbeitung und neuroentwicklungsbezogener Phänotypen. Dieses Ziel ist daher relevant, um zu untersuchen, wie Gating und Verteilung von Natriumkanälen die Physiologie auf Netzwerkebene und nachgeschaltete Transkriptionsprogramme prägen.
Das Na+ CP type VIIIα CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Scn8a-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Scn8a-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.
Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Scn8a nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die Na+ CP type VIIIα-Proteinexpression aufheben.
Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Scn8a-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der Na+ CP type VIIIα-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.
Hauptmerkmale
- sgRNAs, die auf Scn8a-Exone abzielen, die für die Na+ CP type VIIIα-Funktion entscheidend sind
Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
Pool von Plasmiden, die auf mehrere Scn8a-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion
Designvarianten
CRISPRs +/- HDRs
- gRNAs, die vom Na+ CP type VIIIα CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom Na+ CP type VIIIα CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Scn8a-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das Na+ CP type VIIIα HDR-Plasmid (m) und Na+ CP type VIIIα HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Scn8a-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Scn8a-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.