Nanos3 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h): sc-407364

Visão geral

NANOS3 codifica a proteína ligante de RNA Nanos3, um regulador pós-transcricional conservado, necessário para a sobrevivência e a manutenção das células germinativas primordiais humanas. A Nanos3 atua em programas de especificação da linhagem germinativa ao reprimir a tradução e promover a degradação seletiva de mRNAs, integrando-se a vias que controlam decisões de destino celular, proliferação e apoptose durante o desenvolvimento inicial. A desregulação da atividade de NANOS3 tem sido associada a comprometimento do desenvolvimento das células germinativas e a fenótipos relacionados à infertilidade, e foi relatada expressão alterada em determinados tumores derivados de células germinativas. Como determinante da linhagem germinativa, NANOS3 é um ponto de interesse útil para dissecar redes de regulação por RNA e programas transcricionais restritos a linhagens específicas.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO Nanos3 (h) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene NANOS3 em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do NANOS3, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do NANOS3 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína Nanos3.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de NANOS3 para a investigação da sinalização de Nanos3, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) NANOS3 críticos para a função Nanos3
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos NANOS3 para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo Nanos3 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo Nanos3 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus NANOS3. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo Nanos3 Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR Nanos3 (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia NANOS3 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo NANOS3 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.