Plásmido CRISPR de Activación (h) NALP7: sc-403262-ACT

NLRP7 codifica NALP7, un receptor citosólico tipo NOD que participa en la detección inmunitaria innata y en la regulación de la señalización asociada al inflamasoma. Mediante interacciones que influyen en el ensamblaje del inflamasoma, NALP7 puede modular la actividad aguas abajo de la caspasa-1 y el procesamiento de citocinas de la familia de IL-1, vinculándolo con vías inflamatorias y de respuesta al estrés. La expresión de NLRP7 y sus variaciones de secuencia se han asociado con la patobiología reproductiva y placentaria, incluido el embarazo molar hidatidiforme recurrente y trastornos relacionados del desarrollo embrionario temprano. Estas características hacen de NLRP7 una diana útil para analizar la regulación de la inmunidad innata en la biología del trofoblasto, linajes de tipo macrófago y otros contextos en los que el ajuste fino del inflamasoma afecta la homeostasis celular.

NALP7 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de NLRP7 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

NALP7 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus NLRP7 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional NLRP7, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de NALP7. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo NLRP7 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de NALP7 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía NALP7 en células tumorales con expresión de NLRP7 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.