N-type Ca++ CP α1B Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m): sc-419401
- alvos específicos: mouse
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- N-type Ca++ CP α1B O Plasmídeo CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) é um conjunto de plasmídeos, cada um codificando a nuclease Cas9 e um RNA guia (gRNA) de 20 nt específico para o alvo, concebido para uma eficiência máxima de knockout utilizando sequências derivadas da biblioteca GeCKO v2
- As sequências de gRNA direcionam a Cas9 para induzir quebras de cadeia dupla (DSBs) específicas do local no locus genómico N-type Ca++ CP α1B, resultando no knockout do gene através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ)
- Os genes de resistência à puromicina e RFP são flanqueados por sítios LoxP, permitindo a remoção de marcadores de seleção através da recombinase Cre (Cre Vector: sc-418923) após o estabelecimento de linhas celulares knockout estáveis
- Após a transfecção, a eficácia do processo de nocaute genético por ser testada WB, IF ou IHC usando o anticorpo:N-type Ca++ CP α1B Anticorpo (A-2): sc-377489
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
N-type Ca++ CP α1B Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) | sc-419401 | 20 µg | $397.00 |
Visão geral
Cacna1b codifica a subunidade α1B formadora do poro dos canais de Ca²⁺ do tipo N (CaV2.2), um canal de cálcio ativado por alta voltagem, enriquecido em terminais pré-sinápticos, onde acopla a despolarização da membrana ao influxo de Ca²⁺ e à liberação de neurotransmissores. A atividade do CaV2.2 integra-se à maquinaria de exocitose de vesículas sinápticas, à sinalização dependente de cálcio por quinases/fosfatases e a vias de plasticidade sináptica de curto e longo prazo. Em modelos do sistema nervoso de camundongo, alterações na função de CACNA1B têm sido associadas à desregulação da excitabilidade neuronal e da neurotransmissão sensorial, sustentando sua relevância para estudos de circuitos de dor, suscetibilidade a convulsões e fenótipos neuropsiquiátricos. Como o CaV2.2 molda microdomínios de cálcio pré-sinápticos, a perturbação de Cacna1b oferece uma forma direta de investigar a sinalização dependente de atividade e a comunicação em nível de rede.
O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO N-type Ca++ CP α1B (m) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene Cacna1b em linhas celulares mouse. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do Cacna1b, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.
O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do Cacna1b na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína N-type Ca++ CP α1B.
Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de Cacna1b para a investigação da sinalização de N-type Ca++ CP α1B, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.
Características principais
- sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) Cacna1b críticos para a função N-type Ca++ CP α1B
Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
Repórter GFP para identificação de células transfectadas
Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos Cacna1b para melhorar a eficiência do knockout
Compatível com administração por transfecção
Variantes de Design
CRISPRs +/- HDRs
- Os gRNAs codificados pelo N-type Ca++ CP α1B Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) e pelo N-type Ca++ CP α1B Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m2) têm como alvo locais distintos dentro do locus Cacna1b. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
As construções doadoras HDR codificadas pelo N-type Ca++ CP α1B Plasmídeo HDR (m) e o Plasmídeo HDR N-type Ca++ CP α1B (m2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia Cacna1b para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo Cacna1b definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.