N-type Ca++ CP α1B CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-419401
- Zielspezies: mouse
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- N-type Ca++ CP α1B Das CRISPR/Cas9-Knockout (KO)-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, von denen jedes für die Cas9-Nuklease und eine zielspezifische 20-nt-Guide-RNA (gRNA) kodiert, die für maximale Knockout-Effizienz unter Verwendung von Sequenzen aus der GeCKO v2-Bibliothek entwickelt wurde
- gRNA-Sequenzen lenken Cas9 so, dass es ortsspezifische Doppelstrangbrüche (DSBs) im N-type Ca++ CP α1B-Genomlokus induziert, was zu einem Gen-Knockout durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ) führt
- Die Puromycin-Resistenz- und RFP-Gene werden von LoxP-Stellen flankiert, was die Entfernung der Selektionsmarker mittels Cre-Rekombinase (Cre-Vektor: sc-418923) nach der Etablierung stabiler Knockout-Zelllinien ermöglicht
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: N-type Ca++ CP α1B: sc-377489
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
N-type Ca++ CP α1B CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) | sc-419401 | 20 µg | $397.00 |
Übersicht
Cacna1b kodiert die porenbildende α1B-Untereinheit der N‑Typ‑Ca²⁺‑Kanäle (CaV2.2), eines hochspannungsaktivierten Calciumkanals, der an präsynaptischen Endigungen angereichert ist und dort die Membrandepolarisation mit Ca²⁺‑Einstrom und Neurotransmitterfreisetzung koppelt. Die CaV2.2‑Aktivität ist in die Exozytose-Maschinerie synaptischer Vesikel, in calciumabhängige Kinase-/Phosphatase-Signalwege sowie in Mechanismen der kurz- und langfristigen synaptischen Plastizität eingebunden. In Modellen des Mausnervensystems wurde eine veränderte CACNA1B‑Funktion mit einer dysregulierten neuronalen Erregbarkeit und sensorischen Neurotransmission in Verbindung gebracht, was die Relevanz für Untersuchungen zu Schmerzschaltkreisen, Anfallsanfälligkeit und neuropsychiatrischen Phänotypen unterstreicht. Da CaV2.2 präsynaptische Calcium-Mikrodomänen prägt, bietet eine Störung von Cacna1b einen direkten Ansatzpunkt zur Analyse aktivitätsabhängiger Signalübertragung und der Kommunikation auf Netzwerkebene.
Das N-type Ca++ CP α1B CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Cacna1b-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Cacna1b-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.
Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Cacna1b nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die N-type Ca++ CP α1B-Proteinexpression aufheben.
Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Cacna1b-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der N-type Ca++ CP α1B-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.
Hauptmerkmale
- sgRNAs, die auf Cacna1b-Exone abzielen, die für die N-type Ca++ CP α1B-Funktion entscheidend sind
Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
Pool von Plasmiden, die auf mehrere Cacna1b-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion
Designvarianten
CRISPRs +/- HDRs
- gRNAs, die vom N-type Ca++ CP α1B CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom N-type Ca++ CP α1B CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Cacna1b-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das N-type Ca++ CP α1B HDR-Plasmid (m) und N-type Ca++ CP α1B HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Cacna1b-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Cacna1b-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.