Plasmide CRISPR/Cas9 KO N-Myc (m): sc-421918

Présentation

Mycn code le facteur de transcription N-Myc, un membre de la famille MYC qui se fixe sur des motifs E-box afin de réguler des programmes géniques contrôlant la progression du cycle cellulaire, le métabolisme biosynthétique, la biogenèse des ribosomes et la détermination de lignage au cours du développement embryonnaire. Dans les systèmes murins, N-Myc est essentiel à l’expansion des progéniteurs neuraux et mésenchymateux et coordonne les signaux provenant de voies telles que PI3K–AKT–mTOR et MAPK pour moduler la prolifération et la différenciation. Une activité MYCN dérégulée est fortement associée à la transformation oncogénique, à des altérations de l’état de la chromatine et au stress réplicatif, ce qui en fait un nœud central dans les études de la tumorigenèse et de la biologie du développement. Les réseaux dépendants de N-Myc s’entrecroisent également avec les réponses aux dommages de l’ADN et l’apoptose, permettant une interrogation mécanistique du contrôle de la croissance et des décisions de destin cellulaire.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO N-Myc (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Mycn dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Mycn, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Mycn à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine N-Myc.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Mycn pour l'étude de la signalisation de N-Myc, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Mycn essentiels à la fonction de N-Myc
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Mycn pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le N-Myc plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le N-Myc plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Mycn. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le N-Myc plasmide HDR (m) et le N-Myc (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Mycn pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Mycn définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.