Myotilin CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-406960

概要

MYOTは、横紋筋においてZディスクに局在する細胞骨格タンパク質ミオチリン（myotilin）をコードしており、アクチン関連因子と結合してサルコメアの構築と機械的安定性を支えます。ミオチリンは、αアクチニンやフィラミンCなどのタンパク質との相互作用を介して筋原線維形成やZディスク構造の維持に関与し、細胞骨格シグナル伝達やメカノトランスダクションにも影響を及ぼします。MYOT機能の破綻は、Zディスクの崩壊やタンパク質凝集を特徴とする筋原線維性ミオパチーなどの関連筋疾患と結び付いており、筋の構造的完全性やストレス応答を研究する上で重要です。収縮組織における構造的ハブとして、ミオチリンは筋分化、タンパク質品質管理、細胞骨格リモデリングを制御する経路の研究でしばしば取り上げられます。

Myotilin CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるMYOT遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、MYOT内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、MYOTのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、Myotilinタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、Myotilinシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、MYOT欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• Myotilinの機能に不可欠なMYOTエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、MYOTゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• Myotilin CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびMyotilin CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、MYOT遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  Myotilin HDRプラスミド（h）および Myotilin HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはMYOTホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のMYOT標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。