Plasmide CRISPR/Cas9 KO myogenin (m): sc-421806

Présentation

Myog code la myogénine, un facteur de transcription de type hélice-boucle-hélice basique (bHLH) qui agit en aval de MYOD1 et de MYF5 pour déclencher la différenciation terminale du muscle squelettique. La myogénine se lie à des motifs E-box et coordonne des programmes transcriptionnels qui contrôlent la sortie du cycle cellulaire des myoblastes, la formation des myotubes et l’activation de gènes sarcomériques et de gènes structuraux musculaires. Elle fonctionne au sein des réseaux régulateurs myogéniques centraux et interagit avec le remodelage de la chromatine ainsi qu’avec des signaux liés aux voies MAPK/PI3K qui modulent l’engagement de lignée. La dérégulation des programmes transcriptionnels associés à la myogénine est pertinente pour l’étude d’une myogenèse altérée, de la régénération musculaire et des mécanismes des maladies neuromusculaires dans des systèmes de modèles murins.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO myogenin (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Myog dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Myog, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Myog à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine myogenin.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Myog pour l'étude de la signalisation de myogenin, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Myog essentiels à la fonction de myogenin
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Myog pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le myogenin plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le myogenin plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Myog. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le myogenin plasmide HDR (m) et le myogenin (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Myog pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Myog définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.