Plasmide CRISPR/Cas9 KO musculin (h): sc-403242

Présentation

MSC code la musculine, un facteur de transcription à motif hélice-boucle-hélice basique (bHLH) qui module des programmes d’expression génique spécifiant les lignages en se liant à des motifs E-box et en coopérant avec d’autres régulateurs bHLH. La musculine est impliquée dans le contrôle des décisions de destin cellulaire, du calendrier de différenciation et des dynamiques de répression/activation transcriptionnelles dans des contextes développementaux et spécifiques des tissus, avec des effets en aval sur la prolifération et la stabilité phénotypique. Une expression altérée de MSC a été signalée dans plusieurs contextes pertinents pour les maladies, notamment la reprogrammation transcriptionnelle associée au cancer et des modifications de l’état de différenciation, ce qui en fait un nœud utile pour l’étude des réseaux de régulation génique. L’analyse fonctionnelle de la musculine aide à clarifier comment les circuits pilotés par les bHLH s’articulent avec les voies qui gouvernent le contrôle de la croissance et l’identité cellulaire.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO musculin (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène MSC dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du MSC, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert MSC à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine musculin.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en MSC pour l'étude de la signalisation de musculin, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de MSC essentiels à la fonction de musculin
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de MSC pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le musculin plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le musculin plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus MSC. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le musculin plasmide HDR (h) et le musculin (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie MSC pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles MSC définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.