Munc13-2 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-423611

Descripción general

Unc13b codifica Munc13-2, un factor de cebado presináptico de la zona activa, necesario para la maduración de las vesículas sinápticas hasta un estado listo para su liberación y para una liberación eficiente de neurotransmisores evocada por Ca²⁺. Munc13-2 coopera con reguladores de SNARE y con la red RIM/Rab3 para coordinar el acoplamiento, el cebado y la plasticidad a corto plazo, modulando así la fuerza sináptica y la actividad de los circuitos. A través de sus dominios C1 y C2, Munc13-2 integra señales dependientes de diacilglicerol y de Ca²⁺ para ajustar la probabilidad de liberación y la dinámica de los reservorios de vesículas. La desregulación del cebado vesicular y de la transmisión sináptica es ampliamente relevante para fenotipos del neurodesarrollo y neuropsiquiátricos, lo que motiva estudios mecanísticos de Unc13b en la señalización neuronal y la disfunción de redes.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO Munc13-2 (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Unc13b en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Unc13b junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Unc13b tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína Munc13-2.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Unc13b para la investigación de la señalización de Munc13-2, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Unc13b críticos para la función de Munc13-2
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Unc13b para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido Munc13-2 CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido Munc13-2 CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Unc13b. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR Munc13-2 (m) y el plásmido HDR Munc13-2 (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Unc13b para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Unc13b definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.