Mucin 5AC/MUC5AC Plasmide Double Nickase (m): sc-421752-NIC

Muc5ac codifica la mucina formante gel Mucin 5AC/MUC5AC, una glicoproteina secreta fortemente O‑glicosilata che rappresenta un importante componente strutturale della barriera mucosa delle vie aeree e del tratto gastrointestinale negli epiteli murini. La sua espressione regolata sostiene la clearance mucociliare, l’idratazione epiteliale e la difesa innata modulando le proprietà viscoelastiche del muco e limitando il contatto dei patogeni con la superficie cellulare. Muc5ac viene indotto durante la differenziazione epiteliale e il rimodellamento infiammatorio tramite programmi responsivi a citochine e stress, inclusi il segnale EGFR/MAPK e la metaplasia delle cellule caliciformi guidata dall’asse IL‑13–STAT6. Una produzione deregolata di Muc5ac e alterazioni nella glicosilazione delle mucine sono associate a ostruzione da muco e infiammazione cronica in modelli di malattie respiratorie, nonché a modificazioni della barriera epiteliale nella patologia gastrointestinale, rendendolo un readout comune negli studi sull’ipersecrezione delle vie aeree e sull’immunità mucosale.

Mucin 5AC/MUC5AC Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Muc5ac nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Muc5ac. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Muc5ac. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Muc5ac interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.