Plasmide CRISPR/Cas9 KO Msx-1 (h): sc-405732

Présentation

MSX1 code le facteur de transcription à homéoboîte Msx-1, un régulateur de la mise en place des patrons embryonnaires et de l’engagement de lignée, qui contribue à coordonner les interactions épithélio-mésenchymateuses lors du développement craniofacial, des membres et de l’odontogenèse. Msx-1 intègre des signaux développementaux, notamment des programmes transcriptionnels associés aux voies BMP et WNT, afin de moduler la prolifération, la différenciation et l’apoptose au sein de populations de cellules progénitrices. Une expression dérégulée de MSX1 ou des variants avec perte de fonction ont été associés à des anomalies congénitales craniofaciales et du développement dentaire, ce qui reflète son rôle dans la morphogenèse et la spécification tissulaire. À l’âge adulte, l’altération de l’activité de MSX1 est également étudiée pour son impact sur la plasticité cellulaire et l’état de différenciation dans des modèles de biologie du développement et du cancer.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Msx-1 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène MSX1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du MSX1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert MSX1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Msx-1.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en MSX1 pour l'étude de la signalisation de Msx-1, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de MSX1 essentiels à la fonction de Msx-1
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de MSX1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Msx-1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le Msx-1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus MSX1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Msx-1 plasmide HDR (h) et le Msx-1 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie MSX1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles MSX1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.