MRP5 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-402443-ACT

ABCC5は、ヒトのATP結合カセット（ABC）トランスポーターであるMRP5（ABCC5）をコードしており、細胞膜に存在する排出ポンプとして、cGMPやcAMPなどの環状ヌクレオチドに加え、一部のヌクレオシドアナログや有機アニオンを細胞外へ輸送します。MRP5は細胞内の環状ヌクレオチド量（プール）を制御することで、cGMP/PKGおよびcAMP/PKAシグナル伝達に影響を与え、その下流で血管トーヌスの調節、血小板反応性、細胞ストレス応答などに作用し得ます。ABCC5の発現やトランスポーター活性は、異物（xenobiotic）の取り扱いおよび多剤耐性形質の文脈でしばしば解析され、排出能の変化は細胞内代謝物や薬物アナログへの曝露量を変化させ得ます。ABCC5の制御異常は、疾患関連のシグナル伝達や輸送恒常性の変化と関連づけられており、トランスポーター介在性の制御機構を解明する研究における有用な標的となっています。

MRP5 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性ABCC5の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

MRP5 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における ABCC5 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はABCC5転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性MRP5の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のABCC5遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるMRP5依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびABCC5発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるMRP5経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。