MRP3 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-401508-ACT

ABCC3はヒトATP結合カセット（ABC）トランスポーターであるMRP3をコードしており、グルクuron酸抱合体や硫酸抱合体、胆汁酸を含む幅広い有機アニオンを細胞外へ排出する側底膜（basolateral）局在の排出ポンプです。MRP3は、代謝産物のクリアランスを協調させ、異物（キセノバイオティクス）への細胞内曝露を調節することで、肝臓の解毒機能と腸肝循環を支え、トランスポーター活性を第II相代謝や細胞ストレス応答と結び付けています。その発現は胆汁うっ滞や炎症性シグナルの状況で制御されており、ABCC3/MRP3活性の変化は、実験モデルにおける薬物動態の個体差や肝胆道系機能障害との関連が報告されています。これらの特性により、ABCC3は、トランスポーター介在性バリア、代謝リプログラミング、ならびに肝臓および上皮系における適応応答を研究する上で有用な標的となります。

MRP3 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性ABCC3の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

MRP3 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における ABCC3 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はABCC3転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性MRP3の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のABCC3遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるMRP3依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびABCC3発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるMRP3経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。