Plásmido CRISPR de Activación (h) MRP2: sc-400601-ACT

ABCC2 codifica la proteína 2 asociada a la resistencia a múltiples fármacos (MRP2), un transportador de eflujo de la familia ABC (ATP-binding cassette) localizado principalmente en la membrana apical de células epiteliales polarizadas, como hepatocitos, enterocitos y células del túbulo proximal renal. MRP2 exporta una amplia gama de aniones endógenos y xenobióticos, incluidos conjugados de glutatión, glucurónido y sulfato, apoyando la desintoxicación de fase II y la formación de bilis dentro de las vías de transporte hepatobiliar. Al controlar el eflujo celular de metabolitos conjugados, MRP2 contribuye al manejo del estrés oxidativo y a la homeostasis química en los tejidos de barrera. La alteración de la expresión o la función de ABCC2 se ha asociado con fenotipos de excreción biliar deteriorada y con variabilidad en la disposición de compuestos conjugados, lo que lo convierte en un objetivo relevante para estudios mecanísticos en biología hepática y epitelial.

MRP2 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de ABCC2 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

MRP2 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus ABCC2 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional ABCC2, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de MRP2. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo ABCC2 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de MRP2 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía MRP2 en células tumorales con expresión de ABCC2 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.