MRP-S18B Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-412012

Descripción general

MRPS18B codifica la proteína ribosomal mitocondrial S18B (MRP‑S18B), un componente de la subunidad pequeña 28S del mitorribosoma de mamíferos, necesaria para la traducción de proteínas de fosforilación oxidativa (OXPHOS) codificadas por el ADN mitocondrial. Al favorecer la síntesis de subunidades clave de la cadena de transporte de electrones, MRP‑S18B contribuye a la capacidad respiratoria mitocondrial, la producción de ATP y la homeostasis redox, lo que la vincula a vías que controlan la proteostasis mitocondrial y la señalización integrada del estrés. Las alteraciones de la traducción mitocondrial y los desequilibrios de OXPHOS son rasgos recurrentes en trastornos que afectan a tejidos con alta demanda energética y se observan con frecuencia en fenotipos de disfunción mitocondrial asociados al cáncer y a la neurodegeneración. Por ello, MRPS18B se estudia en contextos como la biogénesis mitocondrial, la reprogramación metabólica y la coordinación núcleo‑mitocondrial.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO MRP-S18B (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen MRPS18B en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del MRPS18B junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de MRPS18B tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína MRP-S18B.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en MRPS18B para la investigación de la señalización de MRP-S18B, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de MRPS18B críticos para la función de MRP-S18B
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de MRPS18B para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido MRP-S18B CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido MRP-S18B CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus MRPS18B. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR MRP-S18B (h) y el plásmido HDR MRP-S18B (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología MRPS18B para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana MRPS18B definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.