Plasmide CRISPR/Cas9 KO MRG1 (m): sc-421714

Présentation

Cited2 code le corégulateur transcriptionnel MRG1, une protéine nucléaire qui se lie à CBP/p300 et module des programmes d’expression génique contrôlant la prolifération, la différenciation et les réponses au stress cellulaire dans les cellules de souris. En intégrant des signaux provenant de facteurs de transcription sensibles à l’hypoxie et de facteurs du développement, MRG1 influence les réponses transcriptionnelles dépendantes de HIF ainsi qu’une régulation plus large, médiée par la chromatine, de la spécification des lignages. L’activité de Cited2 est liée à l’embryogenèse et à l’organogenèse, et une dérégulation de cette voie a été associée à des anomalies du développement cardiovasculaire et hématopoïétique. En tant que régulateur contextuel de réseaux transcriptionnels, Cited2 est fréquemment étudié dans des modèles d’inflammation, de stress métabolique et de biologie tumorale, où la disponibilité des coactivateurs et la signalisation hypoxique orientent les décisions de destinée cellulaire.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO MRG1 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Cited2 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Cited2, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Cited2 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine MRG1.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Cited2 pour l'étude de la signalisation de MRG1, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Cited2 essentiels à la fonction de MRG1
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Cited2 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le MRG1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le MRG1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Cited2. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le MRG1 plasmide HDR (m) et le MRG1 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Cited2 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Cited2 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.