Plásmido CRISPR de Activación (h) MPO/Myeloperoxidase: sc-400822-ACT

El gen humano **MPO** codifica la **mieloperoxidasa**, una peroxidasa que contiene hemo y se expresa en altos niveles en neutrófilos y monocitos, y que cataliza la conversión de peróxido de hidrógeno y haluros en ácidos hipohalosos, incluido el ácido hipocloroso. Esta química oxidativa contribuye a la defensa inmunitaria innata, a la formación de trampas extracelulares de neutrófilos y a la modulación de la señalización sensible al estado redox que influye en la inflamación y la remodelación tisular. La actividad de MPO se relaciona con las vías de especies reactivas de oxígeno, la maduración del fagosoma y las interacciones hospedador–patógeno, y también puede promover la modificación oxidativa de proteínas y lípidos. La expresión o actividad desregulada de MPO se ha asociado con trastornos inflamatorios, mayor riesgo de enfermedad cardiovascular y fenotipos mieloides asociados a tumores, lo que la convierte en una diana útil para estudios mecanísticos de inmunometabolismo y estrés oxidativo.

MPO/Myeloperoxidase El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de MPO sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

MPO/Myeloperoxidase El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus MPO en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional MPO, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de MPO/Myeloperoxidase. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo MPO y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de MPO/Myeloperoxidase en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía MPO/Myeloperoxidase en células tumorales con expresión de MPO silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.