MOR-1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-401224

概要

OPRM1はヒトのμオピオイド受容体MOR-1をコードしており、内因性オピオイドペプチドおよび外因性オピオイドリガンドに結合するGi/Go共役型GPCRとして、神経細胞の興奮性や神経伝達物質放出を調節します。MOR-1のシグナル伝達はアデニル酸シクラーゼを抑制し、cAMP/PKA経路を調節するとともに、MAPK/ERKカスケードを活性化し、さらにイオンチャネル活性にも影響を与えることで、疼痛・報酬・ストレス回路におけるシナプス伝達を形作ります。受容体の活性化はβアレスチンのリクルート、脱感作、トラフィッキングを誘導し、MOR-1を受容体の内在化や適応的なシグナル応答と結び付けます。OPRM1の機能や制御の変化は、鎮痛反応の個体差、物質使用に関連する表現型、神経精神学的形質の差異と関連づけられており、神経生物学および薬理学における機序研究の観点から重要です。

MOR-1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるOPRM1遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、OPRM1内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、OPRM1のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、MOR-1タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、MOR-1シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、OPRM1欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• MOR-1の機能に不可欠なOPRM1エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、OPRM1ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• MOR-1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびMOR-1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、OPRM1遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  MOR-1 HDRプラスミド（h）および MOR-1 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはOPRM1ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のOPRM1標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。