Mnk1 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-402417-ACT

Das humane Gen **MKNK1** kodiert die MAP-Kinase-interagierende Serin/Threonin-Proteinkinase 1 (Mnk1), einen nachgeschalteten Effektor der ERK- und p38-MAPK-Signalwege, der extrazelluläre Signale mit der Kontrolle der Translation verknüpft. Mnk1 phosphoryliert eIF4E und moduliert die cap-abhängige mRNA-Translation, wodurch es die Expression von wachstums- und stressresponsiven Transkripten beeinflusst, die an Proliferation, Überleben und inflammatorischen Programmen beteiligt sind. Über diese Signalwege wird MKNK1 häufig in Zusammenhängen untersucht, in denen eine MAPK-getriebene Umgestaltung des Translatoms zu veränderten Entscheidungen über den Zellzustand beiträgt. Eine dysregulierte MKNK1–eIF4E-Signalisierung wurde mit onkogenen Signalnetzwerken sowie der Immun- und Entzündungsregulation in Verbindung gebracht und stellt damit einen hilfreichen Knotenpunkt für mechanistische Studien zur Kopplung von Signalübertragung und Translation dar.

Mnk1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen MKNK1-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

Mnk1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des MKNK1-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der MKNK1-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen Mnk1-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native MKNK1-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von Mnk1-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des Mnk1-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem MKNK1-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.