Partículas Lentivirales de Activación (h) MMTAG2: sc-413147-LAC

C1orf35 codifica la proteína humana MMTAG2, un factor poco caracterizado con vínculos emergentes con la organización nuclear y la regulación transcripcional. Los conjuntos de datos disponibles de genómica funcional sugieren que MMTAG2 podría influir en programas de expresión génica que coordinan transiciones de estado celular, con un posible impacto en vías de proliferación y respuesta al estrés. Se han descrito patrones de expresión alterados de C1orf35 en diversos tipos de tumores y en cribados de perturbación, lo que respalda su uso como un modulador dependiente del contexto de la aptitud celular, más que como un impulsor canónico. Definir las redes dependientes de MMTAG2 puede ayudar a aclarar cómo los procesos asociados a la cromatina moldean la identidad de linaje y fenotipos relevantes para la enfermedad.

Las partículas de activación lentiviral MMTAG2 (h) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de C1orf35 en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral MMTAG2 (h) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción C1orf35, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de MMTAG2. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo C1orf35 y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.