MLTK Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-437372

Panoramica

Map3k20 codifica per la mixed-lineage kinase-like protein (MLTK), una MAP3K serina/treonina che collega segnali di stress e stimoli infiammatori a monte alle cascate di segnalazione MAPK, incluse le vie JNK e p38. Attraverso la fosforilazione delle MAP2K a valle, MLTK contribuisce alla regolazione di programmi trascrizionali che controllano l’apoptosi, il rimodellamento del citoscheletro e l’adattamento cellulare allo stress ambientale. Nei sistemi murini, l’attività di Map3k20 è stata associata a decisioni sul destino cellulare in risposta a stress genotossico e ossidativo e può influenzare nodi di segnalazione che intersecano le vie dell’immunità innata e dell’omeostasi tissutale. Un’alterata organizzazione dei circuiti della via MAPK che coinvolge MAP3K come MLTK è ampiamente rilevante in modelli di neurodegenerazione, patologie infiammatorie e segnalazione da stress associata al cancro, rendendo Map3k20 un bersaglio utile per analisi meccanicistiche.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO MLTK (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Map3k20 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Map3k20 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Map3k20 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina MLTK.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Map3k20 per lo studio della segnalazione di MLTK, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Map3k20 critici per la funzione di MLTK
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Map3k20 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal MLTK CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal MLTK CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Map3k20. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal MLTK Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR MLTK (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Map3k20 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Map3k20 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.