MLL CRISPR Activationプラスミド (h): sc-401307-ACT

KMT2A（MLL）は、SETドメインを有するヒストンリジンメチル基転移酵素をコードしており、H3K4メチル化を触媒してクロマチンのアクセス性と転写プログラムを制御し、造血発生および細胞運命決定を調節します。MLLは核内の大型複合体として機能し、プロモーターやエンハンサーにおいて、エピジェネティックな「書き込み」と転写伸長を協調させます。その結果、HOX遺伝子の制御、DNA損傷応答、分化などの経路に影響を与えます。発現変化やゲノム再構成によるKMT2Aの制御異常は、白血病をはじめとする悪性腫瘍における異常な転写状態と強く関連しており、MLLは腫瘍性遺伝子発現のエピジェネティック制御を研究する上で中心的な結節点となっています。また、クロマチン介在性制御におけるその広範な役割は、ヒト細胞における増殖、系譜コミットメント、転写ネットワークの安定性に対する文脈依存的な影響の検討を後押しします。

MLL CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性KMT2Aの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

MLL CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における KMT2A 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はKMT2A転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性MLLの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のKMT2A遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるMLL依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびKMT2A発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるMLL経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。