MLKL CRISPR Activationプラスミド (h): sc-401248-ACT

ヒトMLKL（mixed lineage kinase domain-like protein）はネクロプトーシスの中核的な実行因子であり、RIPK1/RIPK3シグナルの下流で機能して、炎症性で溶解性の細胞死を誘導します。RIPK3によるリン酸化を受けると、MLKLは構造変化によって活性化され、オリゴマー化したのち細胞膜へ移行し、膜の完全性を損なって損傷関連分子パターン（DAMPs）の放出を促進します。この経路は自然免疫応答やサイトカインシグナル、さらにアポトーシスやパイロトーシスとの制御された細胞死経路間クロストークとも交差し、組織の炎症や宿主防御のあり方を形作ります。MLKL活性およびネクロプトーシスシグナルの破綻は、炎症性・神経変性過程、虚血性障害、腫瘍微小環境の生物学に関するモデルで関与が示されており、MLKLは機序解明研究に有用な結節点となっています。

MLKL CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性MLKLの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

MLKL CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における MLKL 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はMLKL転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性MLKLの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のMLKL遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるMLKL依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびMLKL発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるMLKL経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。