MKP-3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-400850

Übersicht

DUSP6 kodiert die Dual-Spezifitäts-Phosphatase MKP-3, eine zytosolische MAPK-Phosphatase, die bevorzugt ERK1/2 (MAPK3/MAPK1) dephosphoryliert und inaktiviert und dadurch Stärke und Dauer der RTK–RAS–RAF–MEK–ERK-Signalübertragung mitprägt. Durch eine negative Rückkopplung auf die ERK-Aktivität beeinflusst MKP-3 Zellproliferation, Differenzierung und Stressantwort-Programme und trägt zur Aufrechterhaltung der Signalhomöostase in Kontexten bei, die durch Wachstumsfaktor-Signale wie FGFR- und EGFR-Signalwege getrieben sind. Eine veränderte DUSP6-Expression oder -Aktivität wurde mit einer fehlregulierten MAPK-Signalgebung in mehreren krankheitsrelevanten Situationen in Verbindung gebracht, darunter onkogene Signalwegaktivierung, Entzündungsreaktionen und Entwicklungsphänotypen. Als „Gatekeeper“ des Signalwegs wird MKP-3 häufig hinsichtlich seiner Rolle in der Rückkopplungskontrolle, Signalanpassung und ERK-abhängigen transkriptionellen Outputs untersucht.

Das MKP-3 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des DUSP6-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des DUSP6-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von DUSP6 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die MKP-3-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von DUSP6-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der MKP-3-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf DUSP6-Exone abzielen, die für die MKP-3-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere DUSP6-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom MKP-3 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom MKP-3 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des DUSP6-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das MKP-3 HDR-Plasmid (h) und MKP-3 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von DUSP6-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten DUSP6-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.