mitochondrial ferritin Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-426664

Descripción general

Ftmt codifica la ferritina mitocondrial, una proteína de almacenamiento de hierro localizada en la matriz mitocondrial que ayuda a amortiguar el hierro lábil y a limitar el daño oxidativo dependiente del hierro. Al secuestrar hierro ferroso e influir en el metabolismo del hemo y de los complejos hierro‑azufre, Ftmt contribuye a la homeostasis redox mitocondrial, la función respiratoria y las respuestas celulares al estrés oxidativo. Las alteraciones en el manejo mitocondrial del hierro están implicadas en vías relacionadas con la ferroptosis, la neurodegeneración, las miopatías y otros trastornos caracterizados por disfunción mitocondrial y desequilibrio de especies reactivas de oxígeno. En modelos murinos, Ftmt se utiliza para investigar el tráfico de hierro específico de tejidos, el control de calidad mitocondrial y la adaptación al estrés en sistemas metabólicos y neuronales.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO mitochondrial ferritin (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Ftmt en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Ftmt junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Ftmt tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína mitochondrial ferritin.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Ftmt para la investigación de la señalización de mitochondrial ferritin, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Ftmt críticos para la función de mitochondrial ferritin
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Ftmt para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido mitochondrial ferritin CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido mitochondrial ferritin CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Ftmt. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR mitochondrial ferritin (m) y el plásmido HDR mitochondrial ferritin (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Ftmt para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Ftmt definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.