MIS Plasmide Double Nickase (h): sc-400715-NIC

L’ormone anti‑Mülleriano (AMH), noto anche come sostanza inibente Mülleriana (MIS), è una glicoproteina della superfamiglia TGF‑β che trasduce il segnale attraverso AMHR2 insieme a recettori di tipo I per attivare programmi trascrizionali dipendenti da SMAD1/5/8. Nell’uomo, AMH/MIS regola processi chiave dello sviluppo e della riproduzione, tra cui la regressione dei dotti di Müller nell’embrione maschile e la modulazione della follicologenesi e della riserva ovarica nelle femmine. La sua segnalazione si interseca con la più ampia regolazione, mediata dalle vie BMP/TGF‑β, delle decisioni di destino cellulare, della proliferazione e della differenziazione nei tessuti riproduttivi. Un’espressione disregolata di AMH o difetti della via del recettore sono stati associati a disturbi dello sviluppo sessuale e a fenotipi di endocrinologia riproduttiva, e un’alterata attività della via di AMH è oggetto di studio in contesti di patologie delle gonadi e del tratto riproduttivo.

MIS Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus AMH nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di AMH. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di AMH. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con AMH interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.