Plásmido CRISPR de Activación (h) MIA2: sc-418205-ACT

El gen humano MIA2 (actividad inhibitoria del melanoma, miembro 2) codifica una proteína grande secretada y/o asociada al RE, implicada en el tráfico proteico y en procesos relacionados con la matriz extracelular, con vínculos funcionales destacados con la biología de las células hepáticas. MIA2 participa en la homeostasis de la vía secretora y se ha asociado con la regulación de la diferenciación celular, las respuestas al estrés y programas de remodelación tisular que convergen con la señalización inflamatoria y fibrótica. Se han descrito alteraciones en la expresión de MIA2 en diversas patologías centradas en el hígado y en fenotipos relevantes para la malignidad, lo que respalda su uso como una herramienta molecular para estudiar las interacciones del microambiente tumoral y la dinámica del proteoma secretado. En consecuencia, MIA2 es de interés para trabajos mecanísticos en rutas dependientes de la secreción, señalización extracelular y regulación transcripcional asociada a enfermedades.

MIA2 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de MIA2 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

MIA2 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus MIA2 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional MIA2, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de MIA2. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo MIA2 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de MIA2 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía MIA2 en células tumorales con expresión de MIA2 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.