Plásmido CRISPR de Activación (h) Mfn1/Mitofusin 1: sc-400637-ACT

El gen humano **MFN1** codifica la mitofusina 1 (Mfn1), una GTPasa tipo dinamina incrustada en la membrana mitocondrial externa que media la fusión mitocondrial y moldea la arquitectura de la red mitocondrial. Mfn1 se coordina con **MFN2** y **OPA1** para regular la organización de las crestas, el mantenimiento del ADN mitocondrial y la eficiencia bioenergética, vinculando el equilibrio fusión–fisión con la mitofagia y la señalización de apoptosis. Al controlar la conectividad y la distribución de los orgánulos, **MFN1** influye en el metabolismo celular y en las respuestas al estrés en vías relacionadas con la fosforilación oxidativa y la homeostasis de las especies reactivas de oxígeno. La desregulación de la dinámica mitocondrial que involucra a **MFN1** se ha asociado con neurodegeneración, disfunción de cardiomiocitos y fenotipos metabólicos, lo que respalda su relevancia en estudios sobre el control de calidad mitocondrial y los mecanismos de enfermedad.

Mfn1/Mitofusin 1 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de MFN1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Mfn1/Mitofusin 1 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus MFN1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional MFN1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Mfn1/Mitofusin 1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo MFN1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Mfn1/Mitofusin 1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Mfn1/Mitofusin 1 en células tumorales con expresión de MFN1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.