Mfn1/Mitofusin 1 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-400637-ACT

ヒトのMFN1はミトフュージン1（Mfn1）をコードしており、ミトコンドリア外膜に埋め込まれたダイナミン様GTPアーゼとしてミトコンドリア融合を仲介し、ミトコンドリア・ネットワークの構造を形成します。Mfn1はMFN2およびOPA1と協調して、クリステ（ミトコンドリア内膜のひだ）の構造制御、ミトコンドリアDNAの維持、ならびに生体エネルギー効率を調節し、融合—分裂バランスをマイトファジーやアポトーシスのシグナル伝達と結び付けます。オルガネラの連結性と細胞内分布を制御することで、MFN1は酸化的リン酸化や活性酸素種（ROS）の恒常性に関わる経路を通じて、細胞代謝やストレス応答に影響を及ぼします。MFN1を含むミトコンドリア動態の破綻は、神経変性、心筋細胞の機能障害、代謝表現型と関連づけられており、ミトコンドリア品質管理および疾患機構の研究における重要性が示されています。

Mfn1/Mitofusin 1 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性MFN1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

Mfn1/Mitofusin 1 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における MFN1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はMFN1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性Mfn1/Mitofusin 1の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のMFN1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるMfn1/Mitofusin 1依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびMFN1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるMfn1/Mitofusin 1経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。