Melan-A CRISPR Activationプラスミド (h): sc-418014-ACT

MLANAは、メラノソームに局在し、メラノソームの生合成や色素に関連する細胞内構造の形成・組織化に関与するメラノサイト分化抗原Melan‑Aをコードします。Melan‑Aは、MITFなどの転写制御因子により制御されるメラノサイト系譜のプログラムと密接に関連しており、メラノサイトのアイデンティティ維持、抗原提示、免疫認識を支える経路に関与します。その発現は、メラノサイト系細胞の分類や、色素形成および細胞分化を制御する機構の解析に一般的に用いられます。MLANA発現の異常は、メラノサイト系腫瘍の研究や、系譜マーカーが腫瘍生物学および免疫微小環境との相互作用の理解に資する文脈で、しばしば検討されます。

Melan-A CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性MLANAの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

Melan-A CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における MLANA 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はMLANA転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性Melan-Aの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のMLANA遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるMelan-A依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびMLANA発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるMelan-A経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。