MEL-1B-R Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-401526-ACT

MTNR1B codifica il recettore umano della melatonina 1B (MEL-1B-R), un recettore accoppiato a proteine G di tipo rodopsina che trasduce i segnali della melatonina per regolare la temporizzazione circadiana e la fisiologia dipendente dal fotoperiodo. L’attivazione del recettore si accoppia principalmente alle proteine Gi/o per modulare l’attività dell’adenilato ciclasi, la segnalazione cAMP/PKA e i programmi trascrizionali a valle che coordinano i ritmi metabolici cellulari. L’attività di MTNR1B è collegata alla regolazione endocrina e metabolica, inclusa la funzione delle isole pancreatiche e l’omeostasi del glucosio, rendendolo rilevante negli studi sul crosstalk tra ritmo circadiano e metabolismo. Variazioni genetiche e di espressione di MTNR1B sono state associate ad alterazioni dei tratti glicemici e a una maggiore suscettibilità alla disfunzione metabolica, supportandone l’uso come nodo meccanicistico nella cronobiologia e nella ricerca cardiometabolica.

MEL-1B-R Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di MTNR1B senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

MEL-1B-R Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus MTNR1B nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione MTNR1B, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di MEL-1B-R. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus MTNR1B nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da MEL-1B-R nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via MEL-1B-R nelle cellule tumorali con espressione di MTNR1B silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.