Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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MDH2 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-402825
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- MDH2 El plásmido CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) es un conjunto de plásmidos, cada uno de los cuales codifica la nucleasa Cas9 y un ARN guía (gRNA) de 20 nt específico para el objetivo, diseñado para lograr la máxima eficiencia de knockout utilizando secuencias derivadas de la biblioteca GeCKO v2
- Las secuencias de gRNA dirigen a Cas9 para que induzca roturas de doble cadena (DSB) específicas en el locus genómico MDH2, lo que da lugar a la inactivación del gen mediante unión de extremos no homólogos (NHEJ)
- Los genes de resistencia a la puromicina y RFP están flanqueados por sitios LoxP, lo que permite la eliminación de los marcadores de selección mediante la recombinasa Cre (Vector Cre: sc-418923) tras el establecimiento de líneas celulares knockout estables
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: MDH2 Anticuerpo (1G12): sc-293474
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
MDH2 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h) | sc-402825 | 20 µg | $397.00 |
Descripción general
MDH2 codifica la malato deshidrogenasa mitocondrial 2, una enzima clave dependiente de NAD⁺ que cataliza la conversión reversible de malato en oxaloacetato en el ciclo del ácido tricarboxílico (TCA). Al controlar la producción mitocondrial de NADH y la disponibilidad de oxaloacetato, MDH2 ayuda a coordinar el metabolismo oxidativo, la anaplerosis y el equilibrio redox, y sostiene flujos biosintéticos acoplados a la respiración mitocondrial. La función de MDH2 está estrechamente vinculada a la reprogramación metabólica, al manejo de especies reactivas de oxígeno y a vías de control de calidad mitocondrial que determinan la aptitud celular bajo estrés por nutrientes o hipoxia. Alteraciones en la actividad o la expresión de MDH2 se han implicado en fenotipos relevantes para enfermedades asociados a disfunción mitocondrial, incluido el desequilibrio neurometabólico y dependencias metabólicas asociadas a tumores.
El plásmido CRISPR/Cas9 KO MDH2 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen MDH2 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del MDH2 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.
El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de MDH2 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína MDH2.
Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en MDH2 para la investigación de la señalización de MDH2, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.
Características principales
- sgRNA dirigidos a los exones de MDH2 críticos para la función de MDH2
Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de MDH2 para mejorar la eficiencia del knockout
Compatible con la administración mediante transfección
Variantes de diseño
CRISPRs +/- HDRs
- Los gRNA codificados por el plásmido MDH2 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido MDH2 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus MDH2. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR MDH2 (h) y el plásmido HDR MDH2 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología MDH2 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana MDH2 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.