Pas de données CRISPR : l'image illustre la qualité de l'anticorps pour la visualisation des résultats de l'expérience CRISPR.
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Plasmide CRISPR/Cas9 KO MCM5 (h): sc-401980
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- MCM5 Le plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) est un ensemble de plasmides, chacun codant pour la nucléase Cas9 et un ARN guide (gRNA) de 20 nt spécifique à la cible, conçu pour une efficacité de knockout maximale à l'aide de séquences issues de la bibliothèque GeCKO v2
- Les séquences d'ARN guide (gRNA) dirigent Cas9 pour induire des cassures double brin (DSB) spécifiques au site dans le locus génomique MCM5, entraînant un knock-out génique par jonction non homologue (NHEJ)
- Les gènes de résistance à la puromycine et RFP sont flanqués de sites LoxP, permettant la suppression des marqueurs de sélection via la recombinase Cre (Cre Vector : sc-418923) après l'établissement de lignées cellulaires knock-out stables
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: MCM5 Antibody (E-10): sc-165994
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide CRISPR/Cas9 KO MCM5 (h) | sc-401980 | 20 µg | $397.00 |
Présentation
MCM5 code une sous-unité centrale de l’hélicase MCM2–7, qui autorise l’activation des origines de réplication et assure le déroulement de l’ADN pendant la phase S, au sein des complexes de pré-réplication et CMG (CDC45–MCM–GINS). En coordonnant l’activation des origines et la progression des fourches de réplication, MCM5 contribue à la stabilité du génome et s’interface avec la réponse aux dommages de l’ADN ainsi qu’avec les voies de points de contrôle qui limitent la synthèse d’ADN aberrante. Une expression ou une activité dérégulée des protéines de la famille MCM est fréquemment associée à une capacité proliférative accrue et à des signatures de stress réplicatif observées dans de nombreux contextes tumoraux, ce qui étaye son utilisation comme marqueur mécanistique dans les études du cycle cellulaire et du maintien du génome.
Le plasmide CRISPR/Cas9 KO MCM5 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène MCM5 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du MCM5, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.
La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert MCM5 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine MCM5.
Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en MCM5 pour l'étude de la signalisation de MCM5, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.
Caractéristiques principales
- sgRNA ciblant le ou les exons de MCM5 essentiels à la fonction de MCM5
Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de MCM5 pour améliorer l'efficacité du knock-out
Compatible avec l'administration par transfection
Variantes de conception
CRISPR +/- HDR
- Les gRNA codés par le MCM5 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le MCM5 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus MCM5. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Les constructions donneuses HDR codées par le MCM5 plasmide HDR (h) et le MCM5 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie MCM5 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles MCM5 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.