Plasmide CRISPR/Cas9 KO MCM3AP (h): sc-406369

Présentation

MCM3AP (protéine associée à MCM3) est un facteur nucléaire multifonctionnel qui interagit avec le complexe hélicase MCM2–7 et contribue à la régulation de la réplication de l’ADN et de la progression du cycle cellulaire. Elle a été associée à des processus coordonnant l’autorisation de réplication (replication licensing) avec le contrôle transcriptionnel et le métabolisme de l’ARN, reflétant des rôles dans le maintien du génome et la capacité proliférative. La perturbation ou l’expression altérée de MCM3AP a été étudiée dans le contexte du stress réplicatif, de la signalisation associée à la chromatine et des réponses cellulaires aux dommages de l’ADN influençant la stabilité génomique. Ces mécanismes sont fréquemment examinés en biologie du cancer et dans d’autres troubles prolifératifs, où les conflits réplication–transcription et le dysfonctionnement des points de contrôle constituent des thèmes de recherche majeurs.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO MCM3AP (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène MCM3AP dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du MCM3AP, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert MCM3AP à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine MCM3AP.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en MCM3AP pour l'étude de la signalisation de MCM3AP, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de MCM3AP essentiels à la fonction de MCM3AP
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de MCM3AP pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le MCM3AP plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le MCM3AP plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus MCM3AP. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le MCM3AP plasmide HDR (h) et le MCM3AP (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie MCM3AP pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles MCM3AP définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.