MCM2 Plasmide Double Nickase (h): sc-400959-NIC

MCM2 codifica una subunità centrale del complesso elicasi di mantenimento dei minicromosomi (MCM2–7), che abilita (“licenzia”) le origini di replicazione del DNA e guida la progressione della forcella di replicazione durante la fase S. Attraverso un’azione coordinata con CDC45 e il complesso GINS, MCM2 supporta l’assemblaggio del replisoma, le risposte allo stress replicativo e l’accoppiamento della sintesi del DNA alla segnalazione dei checkpoint. L’alterazione o l’espressione deregolata di MCM2 può compromettere la stabilità del genoma, aumentare lo stress replicativo e modificare i programmi di controllo del ciclo cellulare, aspetti frequentemente studiati nei disturbi proliferativi. Come marcatore di cellule in divisione, MCM2 è ampiamente utilizzato per analizzare la dinamica della replicazione, gli stati di licensing associati alla cromatina e i meccanismi di tolleranza al danno del DNA.

MCM2 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus MCM2 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di MCM2. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di MCM2. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con MCM2 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.