Pas de données CRISPR : l'image illustre la qualité de l'anticorps pour la visualisation des résultats de l'expérience CRISPR.
Pas de données CRISPR : l'image illustre la qualité de l'anticorps pour la visualisation des résultats de l'expérience CRISPR.
Plasmide CRISPR/Cas9 KO MCH-1R (h): sc-402512
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- MCH-1R Le plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) est un ensemble de plasmides, chacun codant pour la nucléase Cas9 et un ARN guide (gRNA) de 20 nt spécifique à la cible, conçu pour une efficacité de knockout maximale à l'aide de séquences issues de la bibliothèque GeCKO v2
- Les séquences d'ARN guide (gRNA) dirigent Cas9 pour induire des cassures double brin (DSB) spécifiques au site dans le locus génomique MCH-1R, entraînant un knock-out génique par jonction non homologue (NHEJ)
- Les gènes de résistance à la puromycine et RFP sont flanqués de sites LoxP, permettant la suppression des marqueurs de sélection via la recombinase Cre (Cre Vector : sc-418923) après l'établissement de lignées cellulaires knock-out stables
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: MCH-1R Antibody (52-W7): sc-100327
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide CRISPR/Cas9 KO MCH-1R (h) | sc-402512 | 20 µg | $397.00 |
Présentation
MCHR1 code le récepteur 1 de l’hormone de concentration de la mélanine (MCH-1R), un RCPG de classe A qui se lie au neuropeptide MCH et régule la signalisation neuronale impliquée dans l’homéostasie énergétique, le comportement alimentaire, l’éveil et les processus liés à l’humeur. Lors de son activation, MCH-1R se couple principalement aux voies Gi/o et Gq afin de moduler l’AMPc intracellulaire, la signalisation de la phospholipase C, les flux de calcium et des cascades de kinases en aval telles que ERK/MAPK. L’activité du récepteur influence la transmission synaptique et les sorties neuroendocrines au sein des circuits hypothalamiques et limbiques. Une dérégulation de la signalisation de MCHR1 a été associée à des phénotypes métaboliques, notamment l’obésité et la résistance à l’insuline, ainsi qu’à des caractéristiques neuropsychiatriques pertinentes pour la recherche sur l’anxiété et la dépression.
Le plasmide CRISPR/Cas9 KO MCH-1R (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène MCHR1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du MCHR1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.
La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert MCHR1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine MCH-1R.
Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en MCHR1 pour l'étude de la signalisation de MCH-1R, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.
Caractéristiques principales
- sgRNA ciblant le ou les exons de MCHR1 essentiels à la fonction de MCH-1R
Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de MCHR1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
Compatible avec l'administration par transfection
Variantes de conception
CRISPR +/- HDR
- Les gRNA codés par le MCH-1R plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le MCH-1R plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus MCHR1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Les constructions donneuses HDR codées par le MCH-1R plasmide HDR (h) et le MCH-1R (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie MCHR1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles MCHR1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.