MCART1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-417948

Übersicht

SLC25A51 kodiert MCART1, einen Carrier der inneren Mitochondrienmembran, der an der Aufrechterhaltung des mitochondrialen Redoxstoffwechsels beteiligt ist, indem er den Transport von NAD in die Matrix erleichtert. Durch die Beeinflussung der Verfügbarkeit von NAD für die oxidative Phosphorylierung, TCA-zyklusgekoppelte Dehydrogenase-Reaktionen und die sirtuinabhängige Protein-Deacylierung in Mitochondrien trägt MCART1 zur bioenergetischen Homöostase und zu Stressantworten bei. Störungen der mitochondrialen NAD-Handhabung können metabolische Signalwege und das Gleichgewicht reaktiver Sauerstoffspezies umgestalten – Prozesse, die in proliferativen und degenerativen Krankheitskontexten häufig verändert sind. Entsprechend ist SLC25A51/MCART1 für Studien zur mitochondrialen Funktion, metabolischen Umprogrammierung sowie zu Genotyp-Phänotyp-Zusammenhängen in humanen Zellmodellen von Interesse.

Das MCART1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des SLC25A51-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des SLC25A51-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von SLC25A51 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die MCART1-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von SLC25A51-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der MCART1-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf SLC25A51-Exone abzielen, die für die MCART1-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere SLC25A51-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom MCART1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom MCART1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des SLC25A51-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das MCART1 HDR-Plasmid (h) und MCART1 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von SLC25A51-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten SLC25A51-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.