MBNL3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-406573
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- MBNL3 Das CRISPR/Cas9-Knockout (KO)-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, von denen jedes für die Cas9-Nuklease und eine zielspezifische 20-nt-Guide-RNA (gRNA) kodiert, die für maximale Knockout-Effizienz unter Verwendung von Sequenzen aus der GeCKO v2-Bibliothek entwickelt wurde
- gRNA-Sequenzen lenken Cas9 so, dass es ortsspezifische Doppelstrangbrüche (DSBs) im MBNL3-Genomlokus induziert, was zu einem Gen-Knockout durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ) führt
- Die Puromycin-Resistenz- und RFP-Gene werden von LoxP-Stellen flankiert, was die Entfernung der Selektionsmarker mittels Cre-Rekombinase (Cre-Vektor: sc-418923) nach der Etablierung stabiler Knockout-Zelllinien ermöglicht
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: MBNL3: sc-136168
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
MBNL3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) | sc-406573 | 20 µg | $397.00 |
Übersicht
MBNL3 (muscleblind-like splicing regulator 3) ist ein RNA-bindendes Protein, das YGCY-Motive in prä-mRNAs erkennt und dadurch alternatives Spleißen, mRNA-Stabilität und -Lokalisierung steuert. Es ist an posttranskriptionellen Programmen der Genregulation beteiligt, die Zellzustandsübergänge prägen, darunter differenzierungsassoziierte Spleißentscheidungen und die gewebespezifische Auswahl von Transkript-Isoformen. Proteine der MBNL-Familie sind zentrale Knotenpunkte in RNA-Verarbeitungsnetzwerken, die über isoformabhängige Regulation mit Zytoskelettorganisation, Signalweiterleitung und metabolischer Umprogrammierung verknüpft sind. Eine Fehlregulation des MBNL-vermittelten Spleißens wurde mit durch RNA-Toxizität getriebenen neuromuskulären Krankheitsmechanismen sowie mit umfassenderen, transkriptomweiten Spleißstörungen in Entwicklungs- und krebsassoziierten Kontexten in Verbindung gebracht.
Das MBNL3 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des MBNL3-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des MBNL3-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.
Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von MBNL3 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die MBNL3-Proteinexpression aufheben.
Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von MBNL3-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der MBNL3-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.
Hauptmerkmale
- sgRNAs, die auf MBNL3-Exone abzielen, die für die MBNL3-Funktion entscheidend sind
Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
Pool von Plasmiden, die auf mehrere MBNL3-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion
Designvarianten
CRISPRs +/- HDRs
- gRNAs, die vom MBNL3 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom MBNL3 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des MBNL3-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das MBNL3 HDR-Plasmid (h) und MBNL3 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von MBNL3-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten MBNL3-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.