Plasmide CRISPR/Cas9 KO Mast Cell Tryptase (h): sc-400887

Présentation

TPSAB1 code la tryptase des mastocytes, une sérine protéase sécrétée, stockée dans des granules cytoplasmiques et libérée lors de la dégranulation des mastocytes. La tryptase mastocytaire contribue au remodelage protéolytique de la matrice extracellulaire, à la modulation de la signalisation des cytokines et des chimiokines, ainsi qu’à l’activation des récepteurs activés par les protéases, orientant les programmes d’inflammation et de réparation tissulaire. Son activité est associée à des processus dépendants des mastocytes tels que la perméabilité vasculaire, le recrutement des leucocytes et la réactivité des voies aériennes, avec une pertinence pour l’inflammation allergique et d’autres troubles à médiation immunitaire. En tant que protéase associée aux granules, la tryptase mastocytaire est également utilisée comme marqueur moléculaire pour étudier l’abondance des mastocytes, leur état d’activation et leurs fonctions effectrices dans les tissus humains.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Mast Cell Tryptase (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène TPSAB1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du TPSAB1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert TPSAB1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Mast Cell Tryptase.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en TPSAB1 pour l'étude de la signalisation de Mast Cell Tryptase, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de TPSAB1 essentiels à la fonction de Mast Cell Tryptase
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de TPSAB1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Mast Cell Tryptase plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le Mast Cell Tryptase plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus TPSAB1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Mast Cell Tryptase plasmide HDR (h) et le Mast Cell Tryptase (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie TPSAB1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles TPSAB1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.