Plasmide CRISPR/Cas9 KO Mast Cell Protease 5 (m): sc-421601

Présentation

Cma1 code la protéase 5 des mastocytes murins, une sérine protéase de la famille des chymases stockée dans les granules sécrétoires des mastocytes de type tissu conjonctif et libérée lors de la dégranulation induite par le FcεRI. La protéase 5 des mastocytes participe au remodelage de la matrice extracellulaire et à la régulation de médiateurs vasoactifs et pro‑inflammatoires grâce au processing protéolytique de peptides et de substrats liés aux cytokines, modulant ainsi le recrutement des leucocytes et les réponses tissulaires. Par ces activités, elle contribue à des voies impliquées dans l’inflammation allergique, l’hyperréactivité des voies aériennes et la fibrose tissulaire, et elle est fréquemment étudiée dans des modèles d’inflammation cutanée et de remodelage cardiopulmonaire. Une activité altérée de la protéase 5 des mastocytes a été associée à des modifications du dialogue entre immunité innée et adaptative ainsi qu’à l’homéostasie des tissus barrières dans des contextes de maladies inflammatoires.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Mast Cell Protease 5 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Cma1 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Cma1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Cma1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Mast Cell Protease 5.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Cma1 pour l'étude de la signalisation de Mast Cell Protease 5, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Cma1 essentiels à la fonction de Mast Cell Protease 5
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Cma1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Mast Cell Protease 5 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le Mast Cell Protease 5 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Cma1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Mast Cell Protease 5 plasmide HDR (m) et le Mast Cell Protease 5 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Cma1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Cma1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.