MARCO CRISPR Activation Plasmid (h): sc-402692-ACT

Humanes MARCO (Makrophagenrezeptor mit kollagener Struktur) ist ein Scavenger-Rezeptor der Klasse A, der überwiegend von Makrophagen und spezialisierten Subpopulationen dendritischer Zellen exprimiert wird. Dort vermittelt er die Bindung und Internalisierung eines breiten Spektrums polyanionischer Liganden, darunter bakterielle Komponenten und Umweltpartikel. Durch die Förderung nicht-opsonischer Phagozytose und Partikelaufnahme trägt MARCO zur angeborenen Immunüberwachung, zur Antigenverarbeitung und zur Regulation inflammatorischer Signalwege nachgeschaltet an Mustererkennungsrezeptoren bei. Eine veränderte MARCO-Expression oder -Aktivität wurde mit einer dysregulierten Aktivierung myeloider Zellen und Gewebeentzündung in Verbindung gebracht und wird häufig im Kontext pulmonaler Immunantworten, der Infektionsbiologie und von Phänotypen tumorassoziierter Makrophagen untersucht. Als Oberflächenrezeptor, der die Interaktionen zwischen myeloiden Zellen und ihrem Mikromilieu prägt, ist MARCO relevant für die Untersuchung von Wirt–Pathogen-Interaktionen, Immunzellmigration und inflammatorischem Umbau.

MARCO Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen MARCO-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

MARCO Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des MARCO-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der MARCO-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen MARCO-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native MARCO-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von MARCO-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des MARCO-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem MARCO-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.