MAN2C1 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-404066

Descripción general

MAN2C1 codifica la alfa-manosidasa citosólica 2C1, una enzima clave en el catabolismo de N‑glicanos libres generados durante el recambio de glicoproteínas y el control de calidad. Al recortar residuos de manosa de los oligosacáridos, MAN2C1 favorece el procesamiento de glicanos asociado a la degradación relacionada con el RE y contribuye a la proteostasis celular y al metabolismo de carbohidratos. Las alteraciones en el manejo de N‑glicanos y en la homeostasis de las glicoproteínas se han vinculado con una señalización desregulada y con la adaptación metabólica en múltiples contextos patológicos, lo que convierte a MAN2C1 en un nodo relevante para estudiar la regulación del estado celular dependiente de glicanos. En células humanas, la perturbación de MAN2C1 puede utilizarse para investigar cómo el procesamiento citosólico de glicanos influye en las respuestas al estrés, la comunicación lisosoma–RE y las redes de señalización derivadas de glicoproteínas.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO MAN2C1 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen MAN2C1 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del MAN2C1 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de MAN2C1 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína MAN2C1.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en MAN2C1 para la investigación de la señalización de MAN2C1, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de MAN2C1 críticos para la función de MAN2C1
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de MAN2C1 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido MAN2C1 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido MAN2C1 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus MAN2C1. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR MAN2C1 (h) y el plásmido HDR MAN2C1 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología MAN2C1 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana MAN2C1 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.