MAN2C1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-404066

Übersicht

MAN2C1 kodiert die zytosolische Alpha-Mannosidase 2C1, ein Schlüsselenzym im Abbau freier N-Glykane, die beim Umsatz und der Qualitätskontrolle von Glykoproteinen entstehen. Durch das Abspalten von Mannoseresten aus Oligosacchariden unterstützt MAN2C1 die glykanbezogene Verarbeitung im Umfeld der ER-assoziierten Degradation und trägt zur zellulären Proteostase sowie zum Kohlenhydratstoffwechsel bei. Veränderungen im Umgang mit N-Glykanen und in der Glykoprotein-Homöostase wurden in verschiedenen Krankheitskontexten mit fehlregulierter Signalübertragung und metabolischer Anpassung in Verbindung gebracht, wodurch MAN2C1 ein relevanter Knotenpunkt für die Untersuchung der glykanabhängigen Regulation des Zellzustands ist. In humanen Zellen kann eine Störung von MAN2C1 genutzt werden, um zu untersuchen, wie die zytosolische Glykanverarbeitung Stressantworten, die Kommunikation zwischen Lysosom und ER sowie von Glykoproteinen abgeleitete Signalnetzwerke beeinflusst.

Das MAN2C1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des MAN2C1-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des MAN2C1-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von MAN2C1 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die MAN2C1-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von MAN2C1-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der MAN2C1-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf MAN2C1-Exone abzielen, die für die MAN2C1-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere MAN2C1-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom MAN2C1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom MAN2C1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des MAN2C1-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das MAN2C1 HDR-Plasmid (h) und MAN2C1 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von MAN2C1-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten MAN2C1-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.