Plásmido Doble Nickase (h2) MAL: sc-403024-NIC-2

El gen MAL humano codifica la proteína de mielina y linfocitos, un componente de membrana tetraspan altamente hidrofóbico enriquecido en microdominios de membrana ricos en glucolípidos y colesterol, que ayuda a organizar la clasificación apical y el tráfico vesicular en epitelios polarizados y contribuye a la organización de proteolípidos en células mielinizantes. MAL participa en procesos de transporte dependientes de balsas lipídicas de la membrana e influye en el reciclaje endocítico y la compartimentalización de señales, lo que lo vincula con el mantenimiento de la polaridad epitelial y la formación de dominios de membrana especializados. Se ha descrito una expresión alterada de MAL o su silenciamiento epigenético en múltiples tipos de cáncer y en contextos de desmielinización y función de células inmunitarias, lo que lo convierte en un marcador útil para estudiar la diferenciación de linaje, defectos del tráfico de membrana y la biología tumoral. La edición génica de MAL permite la investigación mecanística de las vías de transporte asociadas a balsas lipídicas, la regulación de la polaridad celular y los efectos específicos del contexto sobre la proliferación, la migración y la dinámica de membrana relacionada con la mielina en sistemas modelo humanos.

MAL El plásmido de doble nicasa (h2) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus MAL en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de MAL. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de MAL. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con MAL alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.