MAL Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-403024-ACT

O MAL humano codifica um proteolipídio tetraspan altamente hidrofóbico, enriquecido em microdomínios de membrana ricos em glicosfingolipídios e colesterol, onde contribui para o tráfego da membrana apical, a triagem vesicular e a estabilização de domínios de membrana especializados. O MAL participa do transporte epitelial polarizado e está implicado na organização de lipid rafts que influenciam a localização de receptores e a propagação de sinais na membrana plasmática. Sua expressão depende da linhagem celular e do estado de diferenciação, o que o torna um marcador útil de estados celulares epiteliais e linfoides e para o estudo da compartimentalização de membranas. A expressão desregulada de MAL foi relatada em múltiplos contextos de câncer e no remodelamento epitelial, sustentando pesquisas sobre como alterações no tráfego e na dinâmica de rafts se relacionam com sinalização oncogênica e polaridade celular.

MAL O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de MAL sem alterar a sequência de ADN subjacente.

MAL O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus MAL em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição MAL, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de MAL. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus MAL nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de MAL no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via MAL em células tumorais com expressão de MAL silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.