Plasmide CRISPR/Cas9 KO Mad 3 (h): sc-406722

Présentation

MXD3 (Mad 3) est un facteur de transcription de type hélice-boucle-hélice basique à fermeture éclair à leucines, qui forme un hétérodimère avec MAX afin de moduler l’expression génique dépendante des boîtes E au sein du réseau régulateur MYC/MAX/MXD. Contrairement aux autres membres de la famille MXD, qui renforcent le plus souvent la répression transcriptionnelle et les programmes de différenciation, MXD3 a été associé, dans certains contextes cellulaires, à des états transcriptionnels liés à la prolifération, influençant la progression du cycle cellulaire et les choix de lignée. Par cet axe, MXD3 intègre des signaux qui façonnent les sorties transcriptionnelles associées à la chromatine et peut affecter des voies impliquées dans le contrôle de la croissance et la régulation du développement. Des altérations de l’expression de MXD3 ont été rapportées dans plusieurs ensembles de données transcriptomiques liés au cancer, ce qui étaye son intérêt pour l’étude des circuits transcriptionnels oncogéniques et des phénotypes de croissance dépendants du contexte dans les cellules humaines.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Mad 3 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène MXD3 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du MXD3, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert MXD3 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Mad 3.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en MXD3 pour l'étude de la signalisation de Mad 3, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de MXD3 essentiels à la fonction de Mad 3
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de MXD3 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Mad 3 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le Mad 3 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus MXD3. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Mad 3 plasmide HDR (h) et le Mad 3 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie MXD3 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles MXD3 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.