Plasmide CRISPR/Cas9 KO M-cadherin (h): sc-401232

Présentation

CDH15 code la M‑cadhérine, un récepteur d’adhérence cellule–cellule dépendant du calcium, particulièrement enrichi dans le muscle squelettique, qui favorise la reconnaissance, l’alignement et la fusion des myoblastes lors de la myogenèse et de la régénération musculaire. Via des jonctions médiées par les cadhérines et leur liaison à la β‑caténine/p120‑caténine ainsi qu’au cytosquelette d’actine, la M‑cadhérine contribue à une signalisation dépendante du contact qui influence le remodelage du cytosquelette, la migration et les programmes de différenciation. L’activité de CDH15 s’articule avec les voies qui gouvernent la dynamique des jonctions d’adhérence et peut moduler des réponses cellulaires pertinentes pour la réparation et le remodelage tissulaires. Une expression altérée des cadhérines, dont CDH15, a été associée à des modifications de l’adhérence cellulaire et du comportement invasif dans des contextes pathologiques, ce qui en fait une cible pertinente pour l’étude des interactions cellule–cellule des tumeurs et de la physiopathologie liée au muscle.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO M-cadherin (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène CDH15 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du CDH15, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert CDH15 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine M-cadherin.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en CDH15 pour l'étude de la signalisation de M-cadherin, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de CDH15 essentiels à la fonction de M-cadherin
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de CDH15 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le M-cadherin plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le M-cadherin plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus CDH15. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le M-cadherin plasmide HDR (h) et le M-cadherin (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie CDH15 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles CDH15 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.