Lubricin CRISPR Activationプラスミド (h): sc-402340-ACT

PRG4はルブリシン（lubricin）をコードしており、ルブリシンは分泌型のムチン様糖タンパク質です。ルブリシンは滑液中および軟骨表面に豊富に存在し、境界潤滑を担うことで、せん断による損傷から組織を保護します。ルブリシンは、タンパク質の吸着や細胞接着を抑制し、関節の微小環境における軟骨細胞および滑膜細胞の相互作用を調節することで、細胞外マトリックスの恒常性維持にも寄与します。PRG4の発現変化やルブリシンの組成変化は、関節変性や滑膜炎症の表現型と関連づけられており、変形性関節症や軟骨損傷モデルの文脈で頻繁に研究されています。筋骨格系の生物学に加えて、PRG4は潤滑機能に特化した細胞集団のマーカーとしても用いられ、機械的ストレスが分泌プログラムやマトリックス関連プログラムをどのように再編するかを調べる際にも利用されます。

Lubricin CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性PRG4の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

Lubricin CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における PRG4 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はPRG4転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性Lubricinの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のPRG4遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるLubricin依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびPRG4発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるLubricin経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。